LC液相色谱仪是在经典液相色谱法的基础上，于20世纪60年代后期引入了LC液相色谱仪理论而迅速发展起来的。与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀。因为较小的填充颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。
使用LC液相色谱仪时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，zui后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。LC液相色谱仪作为一种重要的分析方法，广泛地应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。 LC液相色谱仪的构造 高效液相色谱系统主要由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录仪组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。高效液相色谱的输液泵要求输液量恒定平稳，进样系统要求进样便利、切换严密。同时，由于液体流动相黏度远远高于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。 LC液相色谱仪它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管，内径为4～5mm，长100～250mm。按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净，用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中，用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。 等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液，用正己烷（含 0.05%甲醇）或甲醇：水（83：17）为流动相测定柱效及分离度塔板数在2～3万/ml以上及分离度在1.5以上者，柱效好。为防止柱污染，常用1个 50mm长，4~5mm内径，装有硅胶（40-50mm）或立柱相同填料的保护柱（预柱）接在主柱之前，以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经，以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚，再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。 流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中，经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱，zui后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法，即自洗脱开始到结束，溶剂的配比恒定。 另一类为梯度洗脱法，即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比，从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在色谱过程中很好分离，而整个色谱过程缩短。必须注意，梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中。 LC液相色谱仪是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中。为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如，纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。 LC液相色谱仪的使用和维护注意事项： ①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。 ②应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。 ③一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 ④选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。 ⑤避免将复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。 ⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。 ⑦保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置至次日或更长时间。 ⑧色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。 ⑨以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用。每次分析检测完成后，zui好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。 对LC液相色谱仪的要求 1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质（使用0.45μm或更细的膜过滤）。 2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。 5、长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如，甲醇等），因为，纯水易长霉。 6、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7、C18柱不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8、堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗，清洗方法： ①以异丙醇作溶剂冲洗； ②放在异丙醇中间用超声波清洗； ③用10％稀硝酸清洗； 9、气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10、如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。 11、要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12、LC液相色谱仪更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
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